服务简介 背景：抗体药物分子量大，结构复杂，存在的翻译后修饰（PTM），抗体药物来自于活细胞，包含多种与产品和工艺相关的杂质。针对蛋白药物的复杂性，需要从多个角度使用不同方法对样品进行分析，控制样品结构，纯度，活性及杂质。 方法：从浓度、含量、纯度分析、翻译后修饰一级结构和高级结构、残留检测、活性检测等各个维度对抗体展开分析。 优势：平台分析表征全面多样，质量管理体系全面，仪器设备国际领先，团队经验丰富，确保检测结果准确、稳定、合规、可追溯。 案例：dafabe888手机版登录经过多年的技术沉淀和升级，已建立起单抗，多抗和融合蛋白的多维表征分析平台。累积服务项目数百个，涉及早期研发，小试工艺开发等各个药物研发阶段。按药典建立了完善的标准体系，通过准确且可重复的表征方法对药物生产提供支持和指导。 服务内容 检测类别 检测内容 检测方法 客户提供 交付物及标准 周期 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白浓度 ProA-HPLC、UV280 样品 实验报告 1-2 天 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白纯度　 SDS-PAGE、SEC、 CE-SDS 样品 实验报告 1-2 天 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白电荷异构体 CEX、iCIEF 样品 实验报告 3-7 天 浓度、含量及纯度鉴定 蛋白等电点 iCIEF 样品 实验报告 1-2 天 一级结构分析 蛋白分子量 LC-MS 样品 实验报告 2-4 周 一级结构分析 肽谱分析 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 N糖谱分析 LC-MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 糖基化位点分析 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 寡糖链分析 UPLC-FLD、MS 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 唾液酸含量 UPLC-FLD 样品 实验报告 2-4 周 翻译后修饰 脱酰胺、氧化、N端环化等 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 高级结构分析 二硫键分析 LC-MS、MS 样品 实验报告 2-4 周 高级结构分析 热稳定性 DSF 样品 实验报告 2-4 周 生物学活性检测 亲和动力学分析 BLI、SPR 样品 实验报告 1-2 周 生物学活性检测 抗体结合分析 ELISA 样品 实验报告 1-2 周 生物学活性检测 抗体阻断分析 ELISA 样品 实验报告 1-2 周 生物学活性检测 抗体结合表位分析 BLI、ELISA 样品 实验报告 1-2 周 杂质检测 Protein A 残留检测 ELISA 样品 实验报告 1-2 天 杂质检测 宿主蛋白残留检测 ELISA 样品 实验报告 1-2 天 杂质检测 宿主DNA残留检测 ELISA 样品 实验报告 1-2 天 服务亮点 1. 表征分析，全面多样 分析表征涵盖浓度、含量、纯度分析、翻译后修饰一级结构和高级结构、残留检测、活性检测等各个维度。 2. 质量管理，全面严格 平台建立了全面、严格的质量管理体系，确保分析结果的合规性、真实性、可靠性和可追溯性。 3. 仪器设备，国际先进 平台拥有国际先进的仪器设备和系统规范化的操作方法，确保表征分析结果准确高、稳定性好。 4. 团队成员，经验丰富 团队经已完成数百个相关分析项目，拥有丰富的单抗、多抗、融合蛋白等不同类型分子的表征分析经验。 服务特性 1.多维理化表征分析检测项目种类齐全 dafabe888手机版登录多维理化表征分析平台拥有丰富的检测项目和检测手法，涵盖基础的浓度、含量、纯度分析、一级结构和高级结构、残留检测。 2.业内领先的仪器平台 dafabe888手机版登录的表征分析平台集成了一系列行业内先进的检测设备，致力于保障精准稳定的表征检测分析结果。 ・ ProteinSimple Maurice ・ Waters ACQUITY UPLC-H-Class PLUS ・ Biacore T200 ・ ProbeLife Gator ・ Agilent 1260 HPLC ・ ABI 7500 Fast RT-PCR、 ・ MD SpectraMax iD3 ・ MD AquaMax 4000 ・ BioHandler NPS9100 workstation 案例展示 1. 浓度测定（Protein A-HPLC） 如Fig. 1 所示，通过ProteinA-HPLC法绘制对照抗体IgG1的标准曲线，峰型呈正态分布，峰面积与浓度线性R2为0.995，线性良好，为抗体蛋白浓度测定提供了快速的数据支持。 Fig. 1 对照抗体标准曲线 色谱柱 MAbPac Protein A 规格 4×35 mm 流动相A 50 mM 磷酸盐缓冲液，150 mM 氯化钠，pH 7.4 流动相B 50 mM 磷酸盐缓冲液，150 mM 氯化钠，pH 2.5 流速 2.0 mL/min 进样量 15 µL 温度 25 ℃ 检测波长 280 nm 仪器 Agilent HPLC 1260 2. 蛋白含量测定（UV280） 如Table 1 所示，通过商品化的BSA确认仪器的系统适用性，再将待测样品利妥昔单抗（Rituximab）稀释至紫外分光光度计的吸光度范围进行吸光度值测定（n=3）。最后通过浓度与吸光度，稀释倍数和消光系数间的关系（Con.=A280×DF/ε ）计算得到待测样品的浓度，为蛋白浓度测定提供了准确的数据支持。 Table 1 待测样品的吸光度测定记录 Sample ID User Name Date and Time Comments Triplicates 280 nm Avg Abs 280 nm Sample1 HMM1 3/25/2021 4:41:47 PM BSA-b 0.675 0.676 0.676 0.676 Sample2 HMM1 3/25/2021 4:42:30 PM BSA-c 0.695 0.695 0.695 0.695 Sample3 HMM1 3/25/2021 4:43:21 PM BSA-d 0.677 0.678 0.679 0.678 Sample4 HMM1 3/25/2021 4:52:35 PM Rituximab-B 0.661 0.661 0.661 0.661 Sample5 HMM1 3/25/2021 4:53:30 PM Rituximab-C 0.651 0.650 0.650 0.650 Sample6 HMM1 3/25/2021 4:54:16 PM Rituximab-D 0.658 0.658 0.658 0.658 3.1. 纯度分析（SDS-PAGE） 如Fig. 2 所示，SDS-PAGE能够准确确定分子量大小及主条带纯度，达到纯度分析的目的。 Fig. 2 SDS-PAGE电泳图谱 3.2. 纯度鉴定（CE-SDS） 如Fig. 3、Fig. 4 所示， CE-SDS能够准确定量分子大小分布及主峰纯度, 对抗体的碎片有着更高的分辨率，为抗体蛋白纯度鉴定提供更准确的数据支持。 Fig. 3 非还原 CE-SDS图谱 Fig. 4 还原 CE-SDS图谱 3.3. 纯度分析（SEC-HPLC） 如Fig. 5 所示，SEC可基于溶液中蛋白质的流体动力学尺寸进行分离，能准确分离出Sample1的聚体含量4.21%，单体含量95.79%，达到聚体分析的目的，为抗体蛋白纯度鉴定提供精准的数据支持。 Fig. 5 Sample 1 SEC检测图谱 色谱柱 XBridge BEH 200Å 规格 SEC 3.5 µm (300×7.8 mm) 流动相 150 mmol/L，PB pH 7.4 流速 0.8 mL/min 进样量 100 µg 温度 20 ℃ 检测波长 280 nm 仪器 Agilent HPLC 1260 4. 电荷异质性 如Fig. 6 所示，CEX pH梯度法能准确分离出上市单抗利妥昔的酸性变异体含量13.16%，主成分含量60.56%，碱性变异体含量26.271%，与文献报道一致，为抗体蛋白电荷变异体分析提供精准的数据支持。 Fig. 6 Rituxan CEX图谱 5. 等电点分析 如Fig. 7 所示，iCIEF能够准确检测出上市抗体药物曲妥珠的pI值为8.97，与上市抗体药提供的pI值一致，表明此方法稳定可靠，为抗体蛋白pI值分析提供准确的数据支持。 Fig. 7 曲妥珠pI值检测 6. 分子量检测 如Fig. 8 所示，LC-MS可获得蛋白多肽类药物A的精确分子量。 Fig. 8 药物A的质谱图 糖型 理论分子量 M+G0F+G0F 148220.0 M+G0F+G1F 148383.0 M+G1F+G1F 148545.0 M+G1F+G2F 148707.0 M+G2F+G2F 148868.0 7. 肽谱分析 如Fig. 9 所示， 该蛋白样品的单酶切肽谱覆盖率已达98.4%，3 种酶切肽谱进行重叠分析， 肽谱覆盖率可达100%，可以很理想的准确确证蛋白的氨基酸序列。 Fig. 9 肽段覆盖率 8. 肽图 如Fig. 10 及Table 2 所示， 质量肽图检查法可获得该蛋白样品的肽段修饰、肽段序列、价态、平均分子量、响应值等氨基酸序列的全部信息。 Fig. 10 Trypsin酶解产物紫外色谱标注图谱 Table 2 Trypsin酶解产物CDR肽段信息（部分） CDR肽段 肽段序列 保留时间（min） 批号1 批号2 LCDR3（2） TFGQGTK 14.37 14.35 LCDR1（1） VTITCR 20.88 20.85 HCDR1（1） LSCAASGFR 27.36 27.34 HCDR2（1） APEWVSDINTR 42.93 42.89 9. N-糖型 抗体药物A糖型图谱如Fig. 11 所示，糖型种类和相对数量清晰，与文献报道的糖谱一致，表明此方法稳定可靠，可用于产品一致性和稳定性评价。 Fig. 11 荧光检测器（HPLC / FLD）检测的N糖图谱 10. 唾液酸 如Fig. 12 所示该方法可以准确的检测出单抗阿达木中唾液酸(Neu5Ac，NANA)类型和含量，保留时间与阳性对照一致，表明此方法稳定可靠。 Fig. 12 唾液酸分析 色谱柱 Waters BEH C18 规格 （2.1 mm×100 mm）1.7 µm 流动相 甲醇：乙腈：水（7：9：84） 流速 0.25 mL/min 进样量 3 µL 温度 30 ℃ 检测波长 激发波长373 nm，吸收波长448 nm 仪器 Waters ACQUITY UPLC H-Class 11. Tm值检测 如Fig. 13，Fig. 14 所示，DSF能够准确检测出已上市抗体药物A的Tm1值为69.3℃，Tm2值为81.6℃，该组温度与文献报道的Tm值一致，表明此方法稳定可靠。 Fig. 13 药物A的荧光曲线 Fig. 14 药物A的一阶导数曲线 12. 亲和动力学分析 利用BLI技术，可以分析候选抗体与抗原的结合能力，进而评价其成药性。Fig. 15，16 展示了抗体与抗原结合活性分析的案例。由图可知， 抗体1（Ab1）与抗原的亲和力要比抗体2（Ab2）高一个数量级。 Fig. 15 抗体1与抗原结合（BLI） Fig. 16 抗体2与抗原结合（BLI） Table 3 抗体与抗原亲和力结果 Sample ID KD (M) Kon (1/Ms) Koff (1/s) R2 Ab 1 3.11x10-10 2.16x105 6.71x10-5 0.99 Ab 2 2.42x10-9 1.15x105 2.78x10-4 0.99 13. 蛋白水平亲和阻断评价 Fig. 17 展示了采用ELISA技术分析全长抗体与抗原结合活性的一个案例：先导抗体1与抗原的结合活性相比于对照抗体提高了54.97%，先导抗体2无活性，可筛选先导抗体1 作后续功能研究。 Fig. 18 展示了采用ELISA技术分析全长抗体阻断受配体结合能力的一个案例：先导抗体与对照抗体的阻断能力相当，先导抗体2无阻断能力，从而可以选择先导抗体1 进行功能研究。 Fig. 17 全长抗体结合活性分析（ELISA） Fig. 18 全长抗体阻断能力分析（ELISA） 14. 宿主细胞DNA残留检测 利用荧光探针PCR技术，对抗体药中的CHO宿主细胞DNA进行残留检测。Fig. 19 展示了对一个抗体药物进行宿主DNA残留检测的案例，结果显示，该抗体药CHO宿主DNA残留量为：5.9 pg/mg，提取回收率为83.53%，符合国家标准。 Fig. 19 HCD检测标准曲线 15. 宿主细胞蛋白残留检测 基于ELISA技术，采用宿主细胞蛋白残留检测试剂盒，可对抗体药中的宿主细胞蛋白残留量进行检测。Fig. 20 展示了抗体药物进行宿主蛋白残留检测的一个案例，结果显示，该抗体药宿主蛋白残留量为：5.31 ng/mg，加标回收率为90.18%，符合国家标准。 Fig. 20 宿主蛋白残留检测标准曲线 16. Protein A残留检测 基于ELISA技术，采用蛋白质A残留检测试剂盒，可对抗体药中的蛋白质A残留量进行检测。 Fig. 21 展示了对一个抗体药物进行Protein A残留检测的案例，结果显示，该抗体药Protein A残留量为： 0.0001%，符合国家标准。 Fig. 21 Protein A残留检测标准曲线